化妝品GMP衛(wèi)生規(guī)范2009版之微生物檢驗(yàn)方法
范圍
器和設(shè)備
玻璃珠。玻璃棒?？潭任?，1ml。研碗或均質(zhì)器。恒溫水浴箱。
三、養(yǎng)基和試劑。
鈉8.5g
到1000毫升。
103.43kpa℃15lb↑高壓滅菌。液體培養(yǎng)基成分：酪蛋白17g大豆蛋白3g氯化鈉5g磷酸氫二鉀2.5g葡萄糖2.5g卵磷脂1g吐溫807g蒸餾水1000ml。
103.43kPa℃15lb高壓滅菌lb高壓滅菌。注意振蕩，充分混合沉淀在底部，冷卻至25。
滅菌液石蠟。滅菌吐溫80。
樣品中的樣品有表，一視批化學(xué)品數(shù)量大，機(jī)器抽樣數(shù)量包裝單元。檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)從兩個(gè)以上包裝單位的樣品中提取10g或10ml。包裝量小于20g的樣品可適當(dāng)增加樣品包裝量。
4.2檢查時(shí)，嚴(yán)格持有裝態(tài)器，應(yīng)在前開(kāi)裂，止樣品被污染。
4.3樣品應(yīng)放在室溫涼爽干燥的地方，不得冷藏或冷凍。
4.4只有樣對(duì)樣品進(jìn)行更多的分析，如理學(xué)，先對(duì)樣品進(jìn)行細(xì)菌檢測(cè)，然后對(duì)剩余樣品進(jìn)行其他分析。
4.5檢驗(yàn)中使用的器皿和材料應(yīng)提前滅菌，所有操作應(yīng)在無(wú)菌室進(jìn)行，或在相應(yīng)條件下檢測(cè)糞便大腸菌群或其他致病菌，自報(bào)告之日起保存一個(gè)月。
液體樣品水溶性液體樣品可取10ml滅菌生理鹽水。如果樣品少于10ml，則仍按10個(gè)滅菌生理鹽水制成1檢液。
5.1.2，先加5ml，在80℃~44浴中振蕩混合10min(40℃~44，制成1懸液。
5.2親水樣品：取10g、振蕩混勻、靜置15min的疏水樣品：取10g放入滅菌碗中，加10ml，加10ml，研磨溶解后，加70ml℃?。?0固體樣品。
，在滅菌生理鹽水中，充分振蕩混合，使其分散懸掛，靜置后，?。?0如有均質(zhì)器，上述水溶性膏、霜、粉等，可稱(chēng)為10g↑均質(zhì)1min；疏水霜、霜、眉筆、口紅等，稱(chēng)為10g產(chǎn)品，加10ml滅菌液石蠟，
10ml，70ml~5min。
二、菌落總數(shù)。
本規(guī)范規(guī)定了化妝品中菌落總數(shù)的檢測(cè)方法。
本規(guī)范采用以下定義。
)是指化妝品樣品經(jīng)過(guò)處理，在一定條件下培養(yǎng)后(如值、需氧性質(zhì)等)，1g)的數(shù)量。結(jié)果僅包括本方法規(guī)定條件下一組嗜中溫的需氧菌落總數(shù)。
在被子的衛(wèi)價(jià)上定菌。
儀器三角瓶，250ml。
3.1.計(jì)或精確pH。
3.2.滅菌刻度吸管，10ml。酒精燈。恒溫培養(yǎng)箱：36±1。放大鏡。
3.3.養(yǎng)基和試劑。
3.4.卵磷脂，吐溫80營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。
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3.5
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牛肉膏
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3g
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瓊脂 15g
吐溫 80 7g 水 1000mL
4.2.2 ，將其他成分（除瓊 ，值為 7.1，加入瓊脂，103.43kPa℃ 15 lb高壓滅菌，儲(chǔ)存于冷暗處備用。
3.6 0.5，TTC成分：TTC 0.5g
|
水 100mL
（121）20min ℃箱
5 步驟
5.1:10，分別注入兩個(gè)滅菌容器，每個(gè)容器1ml注入9ml，混合均勻，制成1檢。樣品包括:1000:10000個(gè)吸管。
5.2化為45~50的磷脂吐?tīng)I(yíng)養(yǎng)瓊培養(yǎng)基倒入平盤(pán)中，每盤(pán)約15ml，然后轉(zhuǎn)動(dòng)平盤(pán)，使樣品與培養(yǎng)基充分混合均勻。瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平盤(pán)，在36±1內(nèi)培養(yǎng)48小時(shí)。取另一個(gè)無(wú)樣品的滅菌空盤(pán)，加入約15ml的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平盤(pán)，在36±1培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)。
5.3卵磷脂吐溫80養(yǎng)瓊脂中加入1ml0.5TTC。
六落計(jì)數(shù)法。
每個(gè)平皿的菌落數(shù)翻倍~10次后，找出每個(gè)平皿生長(zhǎng)的相同稀釋度的平均菌落數(shù)。如果平皿中的菌落數(shù)分布均勻，則這半平皿菌落數(shù)可乘以2。
7落計(jì)數(shù)及報(bào)告方法。
當(dāng)7.1~300個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)滿(mǎn)足此范圍時(shí)，即乘以稀釋倍數(shù)（見(jiàn)表1），如果平均菌落數(shù)在30個(gè)之間，則應(yīng)確定兩個(gè)菌落總數(shù)的比例，并報(bào)告其平均數(shù)，如果大于2個(gè)菌落數(shù)（見(jiàn)表1和例3。
7.3倍數(shù)報(bào)告(見(jiàn)表1例4。
7.4個(gè)，稀釋倍數(shù)應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)5，稀釋度最低。
7.5~300，個(gè)時(shí)，以近30平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告(見(jiàn)。
中例6。
7.6或每毫升在10CFU。
7.7以?xún)?nèi)，根據(jù)實(shí)際值報(bào)告，大于100、有效數(shù)字，兩個(gè)有效數(shù)字背后的值按四舍五入法計(jì)算。為縮短數(shù)字背后的零數(shù)，指數(shù)表示(見(jiàn)表1稀釋。
范圍 本規(guī)范適用于化妝品中糞大腸菌群的檢驗(yàn)。
定義糞大腸菌群(Fecalcoliforms一群需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無(wú)芽胞菌，
這種細(xì)菌在44.5培~48小時(shí)內(nèi)直接來(lái)自糞便，是一種重要的衛(wèi)生指示菌。
儀器恒溫水浴箱或隔水恒溫箱:44±0.5。溫度計(jì)。顯微鏡。帶玻片。接種環(huán)。電磁爐。三角瓶，250ml。
3.8×150mm。
3.9
3.10pH或pH。
3.11
3.12.1ml。
4養(yǎng)基和試劑。
4.1成分：40g蛋白質(zhì)。
乳糖10g
0.4紫液5ml吐溫8014g水1000ml。
溶解在少量蒸餾水中。將蛋白質(zhì)、膽鹽和乳糖溶解到其余的7.4個(gè)試管中，加入0.4個(gè)小倒管)。68.95kPa℃10lb滅菌。
4.2）
乳糖10g
瓊脂20g
20毫升溶液。
4.3 0.5美容溶解蒸餾方法：先將瓊脂加入900ml蒸餾水中，加熱溶解，再加入磷酸氫二鉀蛋白蛋白，混合均勻。值~7.4分裝入三角瓶中，103.43kPa。
℃15lb高壓滅菌備用。臨時(shí)加入乳糖，加熱融化瓊脂。冷至60左右，氯化鈉為5g，無(wú)蛋白質(zhì)水（靛藍(lán)基質(zhì)試驗(yàn)）。
水1000毫升。
值為7.0，（121）15min。
4.4對(duì)二甲氨基苯甲醛溶解在75ml。℃±0.5養(yǎng)24h。沿管壁加柯凡克。
~55ml注：蛋白質(zhì)應(yīng)富含色氨酸，每批蛋白質(zhì)購(gòu)買(mǎi)后，應(yīng)先用已知菌種鑒定。
4.5染液制備結(jié)晶紫染色液：結(jié)紫1g。
95乙醇20毫升。
1草酸銨水溶液80ml。
4.5.1.2碘鉀2g先將碘與碘化鉀混合，加入少許蒸餾水，充分振動(dòng)，待完全溶解后，再加入蒸餾水至300ml。
4.5.1.3%乙醇
黃0.25g。
將沙黃蒸解成乙醇，然后用蒸餾水稀釋。
)，100毫升的%乙醇放置過(guò)夜，過(guò)濾，90毫升的%石碳酸水溶液加水90毫升是稀石碳酸復(fù)紅液。
4.5.2
4.5.2.1，水洗。滴加革蘭碘液，作用1min。
4.5.2.3加95，涂片，脫色10s滴加復(fù)染液，復(fù)染1min染色結(jié)果注：如用1:10。
取10ml1稀雙倍乳糖膽鹽(含中和劑)培養(yǎng)基，放置44。
℃培~48h。
5.2℃18小時(shí)。同時(shí)，在~2℃±2小時(shí)后，觀察上述平板電腦上是否有典型的菌落生長(zhǎng)。糞便大腸菌群基于伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)，無(wú)金屬光澤，或粉紫色，中心深菌落，也常為糞便大腸菌群，應(yīng)注意選擇。
5.3在蛋白質(zhì)水培養(yǎng)液中加入靛基質(zhì)試劑約0.5ml紅色；陰性反應(yīng)液表面呈試劑本色。
6 檢測(cè)結(jié)果報(bào)告驗(yàn)陽(yáng)性，可報(bào)告被檢樣品中檢測(cè)糞大腸菌群。
本規(guī)范規(guī)定了化妝品中銅綠假單胞菌的檢測(cè)方法。定義銅假細(xì)菌)在假胞屬、革氏陰桿、氧化℃條件下，對(duì)人有致病性，可使傷口化膿，引起敗血癥等。
儀器培養(yǎng)箱：42±1.36±1。三角瓶，250ml。
滅菌刻度吸管，10ml。顯微鏡。帶玻片。接種針。接種環(huán)。電磁爐。高壓滅菌器。
養(yǎng)基和試劑。
SCDLP見(jiàn)總則中3.26烷基三甲基溴化銨培養(yǎng)基。
10g十六烷基甲基溴化瓊脂20g水1000ml。
加入瓊脂，68.95kPa。
℃10lb滅滅。
胺10.0g鈉5.0g氫鉀1.39g。
二鉀0.73g鎂)0.5g紅0.012g脂20g水1000毫升。
脂.酚紅，103.43kPa℃15lb高壓滅菌后，制成平板備用。
蛋白氯化硫酸瓊甘油（純蒸餾法：將蛋白質(zhì)、氯化鎂、硫酸鉀加入蒸餾水中，加熱溶解，調(diào)節(jié)pH，加入（115）20分鐘高壓滅菌。
明膠培養(yǎng)基成分牛肉蛋白明蒸餾法:將各種成分加入蒸餾水中浸泡20min，隨時(shí)攪拌加熱溶解，調(diào)節(jié)pH，安裝(115)20min菌，直立制成高層備用。
蛋白酵母膏3g鉀2g鈉0.5g水1000ml。
為7.2補(bǔ)充液量，加入硝酸鉀和亞硝酸鈉，溶解混合，分裝在小倒管試管中，68.95kPa℃10lb滅菌后備用。
10g膏3g鈉5g脂15g水1000ml。
解、分裝試管，103.43kPa℃10lb高壓滅菌后，制成斜面?zhèn)溆谩?/span>
操增菌培養(yǎng)：取1:10加至90mlSCDLP℃~24h或藍(lán)綠色。
離培從薄培養(yǎng)線(xiàn)63溴銨平開(kāi)，36±1培養(yǎng)18小時(shí)。銅綠假單胞菌在此培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，其菌落扁平無(wú)定型，對(duì)周養(yǎng)基選擇性強(qiáng)，大腸艾希氏菌無(wú)法生長(zhǎng)，革蘭氏陽(yáng)性菌生長(zhǎng)較差。
板上，36℃培養(yǎng)24小時(shí)，銅綠假單胞菌在此培養(yǎng)基礎(chǔ)上生長(zhǎng)良好，菌落扁平，邊緣染色檢測(cè):疑似涂片革氏染色檢測(cè)為蘭陰性，應(yīng)進(jìn)行氧酶氧試驗(yàn)，取小塊凈白紙放入菌皿中，用菌玻棒取銅假%二甲基對(duì)苯二胺試液。
15s驗(yàn)陰性。
~3℃±1±2h~5ml內(nèi)，氯仿提取物呈藍(lán)色時(shí)，用吸管將氯仿移至另一根試管，加入約1mol/L，上鹽酸液呈粉紅色至紫紅色時(shí)呈陽(yáng)性，表示被檢物中有綠膿硝還原氣驗(yàn)：可疑綠單胞純養(yǎng)物與硝鹽水培基℃±2h相連，觀察結(jié)果。硝酸鹽水培養(yǎng)基內(nèi)的小倒管中有氣體的，采用明化試驗(yàn)，采用銅綠單菌可菌純養(yǎng)，采用明培基內(nèi)置℃℃養(yǎng)24h。如果~30min仍溶解或表面溶解，則采用明膠℃長(zhǎng)試驗(yàn)：采用綠假胞純培物接種普瓊脂面養(yǎng)基，℃℃，~48h銅綠假單胞菌可生長(zhǎng)，呈陽(yáng)性，近似熒光假。
如果檢測(cè)結(jié)果是報(bào)告性的，可以報(bào)告檢測(cè)樣品中檢測(cè)到的銅綠假單胞菌；如果綠膿菌素試驗(yàn)呈陰性，液化明膠。當(dāng)硝酸鹽和℃生長(zhǎng)試驗(yàn)呈陽(yáng)性時(shí)，仍可報(bào)告檢測(cè)樣品中檢測(cè)到的銅綠假單胞菌。
將金黃色葡萄球菌定義為革蘭氏陽(yáng)性球菌，呈葡萄狀排列，無(wú)芽胞。這種細(xì)菌是葡萄球菌中對(duì)人類(lèi)致病性最強(qiáng)的一種，可引起人體局部化膿性病變，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致。
本規(guī)范適用于化妝品中金黃色葡萄球菌的檢驗(yàn)。
3器和設(shè)備
液體培養(yǎng)基。
4.27.5蛋白牛肉氯化蒸餾水加工方法：將上述成分加熱溶解，調(diào)節(jié)pH，分裝，103.43kPa℃15lb高平板。
10g膏5g浸丙酮鈉10g酸12g)5g。
脂20g
水950毫升。
pH7.0增菌劑的制備:30與滅菌過(guò)濾1混合，保存方法:將各種成分加入蒸餾水中，加熱煮沸，完全溶解，冷至25℃校正pH瓶95ml(121)高度。加入℃，使用前在冰箱內(nèi)儲(chǔ)存不超過(guò)48h。
4.4成分：營(yíng)養(yǎng)瓊脫纖維羊血（或兔血）10ml。
℃左右無(wú)平板，放入冰箱備用。
4.5成分：蛋白質(zhì)10g甘露醇10g麝香草藍(lán)溶蒸餾法：將蛋白質(zhì)、氯化鈉、牛肉膏加入蒸餾水中，加熱溶解，調(diào)節(jié)pH7.4，加入甘露醇和（115）20min兔（人）血漿。
%(121)30min加兔(人)全血4~3000rpm~5min。
操增菌：取1稀液體培養(yǎng)基，36±1培養(yǎng)24h。
%分離:從上述增菌培養(yǎng)液中，取1個(gè)接種環(huán)，在氏培養(yǎng)基上劃線(xiàn)接種，如℃~48小時(shí)為金黃色，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，周?chē)腥苎?。在巴基斯坦，它是圓形的，光滑的，凸起的，濕潤(rùn)的，直徑2毫米，灰色到黑色的顏色，淺色的邊緣，類(lèi)似的菌落溶解在周非脂肪，但沒(méi)有濁帶和透明帶。選擇單個(gè)菌落，將其分為血瓊脂平板電腦和36個(gè)。
℃培養(yǎng)24小時(shí)。染檢：取純菌、片、行蘭氏色鏡檢查金色葡萄球?yàn)楦锸蟸。
1√m甘發(fā)酵加入~3mm℃±2h金黃色葡萄球菌應(yīng)能發(fā)酵甘露醇血漿凝固酶試驗(yàn)：吸收1:4±2h?！婷堪胄r(shí)觀察一次，6小時(shí)呈陽(yáng)性，血漿凝陽(yáng)性，菌株肉養(yǎng)分和培養(yǎng)。
0.5ml血漿0.5ml。
6.范適用于各種化妝品中霉菌和酵母的計(jì)數(shù)。
定義霉菌和酵母菌數(shù)量測(cè)定(Determinationofmoldsandyeastcount是指化妝品檢樣在一定條件或1ml及酵母菌污染程度及其一般衛(wèi)生狀況下。
72培養(yǎng)72h。
3器和設(shè)備
試管：15。平皿：直徑9cm。
10ml。
酒精燈。高壓滅菌器。
養(yǎng)基和試劑。
見(jiàn)總則中3.1虎紅(孟加拉紅)培養(yǎng)基。
10g硫酸鎂(含7H2O瓊脂20g)。1/3000水1000毫升。發(fā)霉方法：除虎紅外，加入蒸餾溶解，然后加入虎溶液。分離后，103.43kPa℃15lb高壓滅菌，少量乙醇溶解氯霉素，過(guò)濾溶解后加入30mg培加鏈霉素。
5作步驟
5.1見(jiàn)菌落總數(shù)測(cè)定中6.1取1.1.1分別注入滅菌平皿，每種稀釋度各用2。
℃±1左右的虎紅培養(yǎng)基應(yīng)充分搖勻。固化后，翻轉(zhuǎn)平板電腦，在℃下飼養(yǎng)72小時(shí)，計(jì)算平板電腦中生長(zhǎng)的霉菌和酵母的數(shù)量。如果霉菌擴(kuò)散生長(zhǎng)，為避免±2小時(shí)計(jì)算方法：點(diǎn)擊每個(gè)板生長(zhǎng)霉菌和酵母的數(shù)量，每個(gè)釋放的平菌~50為每g）樣品中所含的霉菌和酵母的數(shù)量。其他范圍內(nèi)的菌落數(shù)報(bào)告應(yīng)參照每g或每ml（ml）
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